過去30年來,HPLC肩負了分析化學中有機分析的許多重要責任,而其中逆相層析管柱的使用又佔其中大 部分。但隨著藥物與食品分析的比重逐步升高,高極性化合物的分析需求日益提高,逆相層析已不能解決所 有HPLC分析遇到的問題。高極性有機化合物的分析,傳統方法以正相層析、離子交換等方式完成,但正相 層析所需使用的低極性溶劑對水溶性物質的低溶解度限制了其應用,而離子交換管柱的應用性與價格也限制 了其部分使用性。

近期HPLC最夯的議題就是HILIC 材質於HPLC的應用。HILIC全名為Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography,意為”親水性作用液相層析”。相對於逆相層析適用於分析中至低極性化合物,HILIC 材質的分析範圍則為中至高極性的化合物,如圖1 所示,在HPLC 的分析光譜中,HILIC 管柱補足了RP 管柱 的不足。

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HILIC 管柱為所有親水性管柱材質的總稱,包含了所有中高極性官能基的材質,傳統normal phase LC 所使 用的Si, Diol, NH2 也歸納為HILIC 管柱之內。圖二所示為HILIC官能基的類別,中性HILIC官能基含極弱的離 子作用力,因此對離子性化合物的分析能力較弱。帶電性的HILIC 官能基如Si, amino 對離子性物質的選擇性較強,但其分析效能受移動相pH 值的影響也大。雙離子性的HILIC管柱在官能基上同時具備陰、陽離子, 並且此二離子不受移動相pH 值的影響,可同時分析帶正電或負電的化合物,應用較廣。

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HILIC 管柱相較於normal phase 管柱的優勢為使用的移動相為高極性的溶劑與水,對水溶性分析物的溶解度較高。

HILIC 分析的機制如圖三,首先在官能基上形成一層水層,讓官能基展開,移動相中的有機層則在水層之外 形成有機層,HILIC分析有兩個機制,其一經由待測物在水層/有機層的分布形成分離,其二則是待測物離子 基與官能基上離子基的離子交換作用,透過此兩機制對中、高極性物質形成分離。

作HILIC 管柱方法開發時,須掌握與逆相管柱相反的沖提原則,水為HILIC管柱中最強的沖提液,高比例的有機溶劑則能讓分析物的滯留延長。而高極性的化合物會比低極性的有更長 的滯留,如圖四所示。

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Merckmillipore HILIC 管柱為專利雙離子(zwitter ion)型態官能基,廣 泛適用於各類中、高極性化合物的分析。也被美國FDA採用 為三聚氰胺的標準方法,對結構類似的三聚氰胺與三聚氰酸有很好的分離效果。目前有ZIC HILIC 及ZIC cHILIC兩種管柱可供選擇,不同位置的陰、陽離子官能基提供了不同的離子交換能力,對極性物質的沖提效 果也有不同的選擇。

ZIC HILIC管柱不但適用於有機離子性化合物的分析,也可用於醣類、有機酸及無機離子的分析,且可將陰、陽離子在同一方法一併分析,如圖五、圖六。

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