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Winning Western！如何創造西方墨點法勝利方程式？
蛋白質電泳及西方墨點法（Western Blot）是蛋白質研究的核心技術，根據統計，八成以上的蛋白質研究實驗室使用此技術。西方墨點法看似相當直觀，實則在將模糊的墨點圖轉化為清晰、可信結果的過程中，每一個步驟都有極大的改善空間。
Merck 將在 2021 年 12 月 9 日 (四) 下午 2 點 ~ 3 點，舉辦線上中文講座「如何創造西方墨點法勝利方程式？」，講座當天還有限定驚喜活動等您來參加！
| 您將學到什麼：
在本講座中，我們將帶您回顧西方墨點法的基礎知識、辨認常見的問題排除議題、認識西方墨點法的最新技術。我們也將介紹《默克 WB 俱樂部》新網站及新制度，歡迎您加入俱樂部、獲得入會大禮包、累積滿額禮，讓默克療癒您的 WB 日常！ |
研討會適合對象：
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| 研討會講師：
台灣默克產品專員 Amy Lin |
| 研討會時間：(已結束)
2021/12/9（四）下午 14:00～15:00 |
Q1：請問轉漬及潤濕PVDF時用甲醇或乙醇的差異在哪裡？
A1：PVDF使用前需在醇類溶液中浸泡，以活化膜上的正電基團，使其更容易與帶負電荷蛋白結合。只要是醇類溶液皆可使用，如：>50% v/v的甲醇、乙醇、異丙醇。參考資料：Immobilon®-P Transfer Membrane User Guide第2頁。
Q2：請問PVDF膜透光確認蛋白質是用什麼樣的光去照射？
A2：使用一般燈箱照射即可。
Q3：之前實驗室將NC膜換成PVDF膜使用後發現背景變得比較髒，想問原因以及解決方法。
A3：一般而言，NC膜換成PVDF膜後，背景值通常會變低，原因是PVDF膜對蛋白質以外的物質親和力極低。假如您持續遇到背景值的問題，歡迎您提供實驗條件與我們進一步討論，讓我們協助您找出改善的方式。
Q4：浸泡PVDF的甲醇濃度會影響後續的效果嗎？
A4：建議使用>50% v/v的甲醇、乙醇或異丙醇，浸泡10–20秒，或浸泡至膜從不透明白色轉變為半透明灰色。
參考資料：Immobilon®-P Transfer Membrane User Guide第４頁。
Q5：請問甲醇濃度過高或泡太久會有甚麼負面效果嗎？
A5：建議使用>50% v/v的甲醇、乙醇或異丙醇，浸泡10–20秒，或浸泡至膜從不透明白色轉變為半透明灰色。
甲醇濃度若太低、浸泡時間不足，可能導致預潤濕不完全，會影響蛋白質吸附在膜上的能力。
參考資料：Immobilon®-P Transfer Membrane User Guide第４頁。
Q6：請問gel transfer之前可以浸泡在transfer buffer 15分鐘這一步，講者解釋可以移除SDS，但transfer buffer裡不是也有SDS嗎？
A6：在WB慣行方式下，通常在跑完電泳後，用戶即會將凝膠組裝為轉漬三明治、進行轉漬，通常組裝時間不會超過15分鐘。我們建議用戶可以在進行轉漬之前，先在transfer buffer中預先平衡您的凝膠，建議浸泡時間15分鐘，在此條件下可以最佳化地讓凝膠中的SDS被預先去除，後續讓蛋白更好地結合到膜上。
Q7：TurboMix的兩種running buffer能夠跑出不同結果的原因以及機制？
A7：聚丙烯醯胺凝膠電泳（Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE）使用不連續緩衝系統，在凝膠中的緩衝離子與跑膠緩衝液中的離子不同，這兩種離子之間的「電泳移動率」的差異形成了蛋白質穿過的移動電壓梯度。因為MOPS running buffer和MES running buffer中所含之離子不同，因此可以達成不同的分離效果。
Q8：請問可以單買WB滾輪嗎？
A8：購買Immobilon® NOW預先裁切轉漬膜，凡有WB會員身份者即加贈「WB必備滾輪」。「WB必備滾輪」也可以單獨購買，其貨號為SNAP2RL，歡迎與我們聯繫取得報價。（下方為使用示意圖，貨號SNAP2RL不含墊板）
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